国际著名病理学家Karl Lennert曾经说过：“技术是病理学之母”。病理组织学属于形态学检验，组织病理学是将病变组织制成厚约数微米的切片，经不同方法染色后用显微镜观察其细微病变，对疾病做出病理学诊断。组织病理分析是检验大多数动物模型实验成功与否的金标准。病理学基本检验技术包括组织固定、石蜡制片、苏木素-伊红染色及常用特殊染色技术。

“操千曲而后晓声，观千剑而后识器”，阅读下文自测病理组织学知识你知多少~

尊龙凯时人生就博官网登录生物

一、石蜡切片与冰冻切片

（一）石蜡切片制备流程

（二）冰冻切片制备流程

TIPS：石蜡切片和冰冻切片如何选择?

1、冰冻切片优点制片时间短，时间快；缺点保存时间短；

2、石蜡切片对组织的形态保存比冰冻切片好,标本可以长期保存；

3、常规染色，组化优先推荐做石蜡切片；

4、免疫荧光推荐用冰冻切片 (石蜡有自发荧光)；

5、脂质染色、ROS染色、 ATP染色，胆固醇染色推荐做冰冻切片。

二、HE染色

苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。

图注：尊龙凯时人生就博官网登录生物HE染色图

图注：HE染色实验流程图

HE染色过程可能出现问题：

1、HE染色最常见的红蓝失调

偏蓝色：苏木素染色过深，分化不够；伊红试剂过期；伊红染色时间太短，分化过度。

偏红色：苏木素染色过浅，分化过度；组织固定不佳，细胞核不着色；脱蜡不彻底，苏木素染不上；苏木素氧化成熟不够；伊红染色过深，分化不足。

2、HE染色后出现的大白色斑块或斑点

答：脱蜡前烤片温度偏低，时间过短，蜡未完全融化；切片在脱蜡溶剂中停留时间过短；脱蜡溶剂使用太久，得更新。

3、细胞核染色过浅，颜色暗淡

答：切片在苏木素染液中停留过短，或苏木素过度氧化失效，或分化时间太长。对策：重新染色。将组织切片放入0.01%氢氧化钠、0.5%氨水、饱和的碳酸氢钠溶液、乙醇溶液，每个3-5min即可，接着重新染色。可以适当地组织的嗜碱性以增强核染色，如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中3h，自来水冲洗5-10min染色，或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中1h，自来水冲洗10min染色。

4、细胞核染色过深，胞浆着蓝色

答：切片在苏木素染液中停留过长；或切片太厚；或分化时间太短。这种情况首先镜下看看切片厚度(最佳厚度1-2层细胞核)，要么重新染色，要么重新制片。

5、细胞核呈棕红色改变

答：苏木素染液过度氧化；或苏木素染色后反蓝不足导致。应该立即更换苏木素染色液。或在流动自来水(一般自来水PH7.5-7.8)，或在稀释的氨水溶液，或在0.2%碳酸氢钠中适当浸泡，这些步骤均可一定程度地加强苏木素染色后的反蓝效果。

6、伊红染色较淡

答：伊红的PH改变了(PH可能已大于5)；或反蓝液体未漂洗干净，残留后影响胞浆嗜酸性染色；或者切片太薄并且在随后的脱水步骤停留过久。对策：检查伊红染色液PH，可采用乙酸调至4.6-5.0。根据以上提示，调整实验步骤。

尊龙凯时人生就博官网登录生物

三、免疫组化

免疫组化是应用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术。

图注：尊龙凯时人生就博官网登录生物免疫组化图

图注：免疫组化实验流程图

图注：尊龙凯时人生就博官网登录生物其他染色图

四、各类组织常见染色方法及指标

尊龙凯时人生就博官网登录生物病理组织学技术服务

尊龙凯时人生就博官网登录生物病理组织学技术服务是尊龙凯时人生就博官网登录生物六大技术服务平台之一，基于动物技术平台搭建而成，欢迎客户致电咨询，我们竭诚为您服务~